自噬的研究方法

自噬研究都有些方法？

来源右哉实验万事屋

自噬好像还算是个热点，作为一个热点的话，那研究的话，有些什么实验呢？

一、电镜

最最常见的，无非就是电镜：

二、WB

电镜并不足以说明分子水平的机制，于是就出现了大量的自噬的靶标，比如Atg8/LC3等等，但刚开始都是做一些WB来进行验证：

这类WB，经常会±自噬抑制剂来进行实验，看看是不是与自噬有关。当然，就算是LC3 I和LC3 II看上去结果也是比较单薄的，于是就诞生了GFP-Atg8/LC3，用融合的GFP被降解下来，说明自噬的形成：

三、荧光电镜及免疫荧光

同样，也有用荧光电镜来检测的：

这种降解GFP的方法可以验证自噬，但其实更直接的方法，就是直接给自噬体加上荧光，然后用confocal来进行验证：

四、流式细胞术

当然，流式验证，也能说明自噬体形成的问题：

五、其它

当然，除了自噬本身的标记蛋白LC3或者Atg以外，还有很多自噬底物的检测，比如SQSTM1这样的蛋白：

自噬被抑制后，这个蛋白就开始累积了。好吧，一般在文献中管这个基因叫P62。

而MTOR, AMPK，Atg1/ULK1的激酶活性也是检测自噬的常见桥段：

除了这些，还有就是不是特别常见的内源性的WIPI检测，但这个价钱就比较高了：