绝大多数有限细胞系、连续细胞系的原代培养都是贴壁依赖，因此依附于某一表面形成单细胞层。但是还有一些细胞，特别是来源于血液系统或某些特定肿瘤组织的细胞，是不依赖于贴壁的，悬浮生长---悬浮培养细胞。

一、悬浮培养细胞的优点：

1、传代时只需要对细胞进行稀释即可

由于不存在蛋白水解酶、机械力等造成的创伤，传代后基本不会影响细胞生长速率。

2、能充分利用培养空间，能够直观观察到细胞规模扩大

细胞可以在类似于培养酵母菌或细菌的发酵罐样的生物反应器内大规模扩增。

二、悬浮培养细胞接种密度：

根据细胞类型不同，悬浮培养的接种密度通常介于 2×10⁴ cells/ml到5 × 10⁵ cells/ml之间，有些细胞甚至可以达到2 x 10⁶ cells/ml。

三、悬浮培养细胞传代步骤：

1、事先将完全培养基自冰箱内拿出，平衡至室温。

2、使用移液枪吹打重悬培养在静置培养容器内的细胞，使细胞悬液充分混匀。取适量细胞悬液用血球计数板计算细胞密度。

3、根据说明书推荐的最低接种密度及步骤 2 算出的细胞密度，计算需要接种到新培养容器内的细胞悬液体积以及需要加入的新鲜培养基的量。

4、在新的培养容器内加入步骤 3 计算出的所需添加的新鲜培养基及细胞悬液。如有必要，可在培养容器内充满无菌过滤的 CO2，封好培养容器并置于合适的温度下孵育培养。

5、通常情况下，换液时不需要每次都完全更换成新的培养基，除非细胞密度非常高或者是培养基的pH偏酸性（培养基颜色偏黄）。如需完全更换培养液，将细胞悬液在 125g 离心力下离心10 min，吸弃旧培养基，然后使用新鲜培养基重悬细胞。

四、悬浮培养细胞活力低问题分析：

1、传代前，细胞长时间处于非常搞的细胞密度环境下

此时，培养基pH偏酸，颜色变黄。  

解决对策：通过温和离心细胞的方式彻底去除旧的培养基，然后以较低的密度重悬于新鲜培养基。

2、细胞悬液的密度远低于推荐的细胞密度范围  

解决对策：适度离心重新收获细胞，然后以合适的密度重悬于新鲜培养基内。

3、收获细胞时操作步骤太剧烈

例如使用移液枪吹打过于剧烈，剧烈离心或离心时间过长，剧烈刮擦或震荡等都有可能造成细胞损伤。

解决对策：缓慢温和操作。

4、培养基选择不恰当

解决对策：推荐使用与原代细胞相配套的专属培养基。