您好,欢迎光临壮志生物网站!
关注我们
服务热线:029-82520312

全部产品分类

您当前位置:首页 >> 资料中心 >>  常见问题

细胞培养基的选择与更换

时间:2017-11-03 17:42:39 浏览:

尽管绝大多数细胞系都可以在不止一种培养基内生长,客户既可以选用来自不同供应商的商品化培养基,也可以使用自行配制的培养基。但是,值得注意的是,来自不同供应商的培养基,即便是拥有类似甚至相同的名称,配方及培养细胞的性能等方面也不尽相同。而自行配制的培养基,虽然成本很低,但是一方面配制比较繁琐,费时费力。另一方面,配制完全培养基所需要的基础培养基、细胞添加因子、血清等原材料极有可能存在批次间的差异,很难保证不同批次完全培养基的稳定性。

此外,任何培养条件的改变都有可能造成细胞系特性的改变。因此,为保证整个实验过程中细胞系的稳定,建议从一开始就选用推荐使用的培养基、培养基添加物等培养体系进行培养。

在某些特殊情况下,如确实需要更换培养基,可按照以下步骤进行操作,逐步使细胞适应新的培养基:

1. 1:2的传代比例将细胞一分为二到两个新的培养皿内继续培养

其中一个培养皿作为对照,继续使用原来的培养基培养。另一个培养皿作为实验组,使用新旧培养基按照1:1配比混合后的培养基培养。 注意:采用相对较低的传代比例1:2进行传代,目的是缓解传代过程及新培养基给细胞生长带来的双重压力。

2. 分别监测两个培养皿内细胞形态、生长速率等方面的变化

如果两个培养皿内的细胞没有明显差异,则接下来仍然按照1:2的传代比例分别进行第二次传代。对照组仍然使用旧的培养基培养,而实验组则采用新旧培养基按照3:1配比混合(25% original, 75% new)后的培养基培养。

3. 继续监测两个培养皿内细胞形态、生长速率等方面的变化

如若两者之间无明显差异,则分别继续进行第三次传代。在第三次传代时仍然按照1:2的传代比例进行,实验组使用新旧培养基按照7:112.5% original, 87.5% new)配比混合的培养液培养。对照组仍使用旧的培养基培养。

4. 继续监测实验组和对照组细胞形态、生长速率等方面的变化。

如若两者之间仍然无明显差异,则分别按照1:2的传代比例继续进行第四次传代。此时,对照组仍使用旧的培养基培养,而实验组则完全更换成新的培养基培养。此时,细胞应该已经完全适应新的培养基了。 注:为确认细胞是否已经完全适应新的培养基,可以分别对两组细胞进行功能性测试。如果在功能性测试过程中任何一个时候,实验组表现与对照组不同,重复步骤23多传几代,直至与对照组细胞完全一致。

 

序号 最新资讯 浏览次数 发布时间
1 实验室有毒试剂及防护 258 2018-01-19
2 如何使 Western blot 结果更漂亮 741 2017-11-14
3 PCR 电泳常见问题 768 2017-11-14
4 qPCR 引物设计 309 2017-11-14
5 如何预测基因的转录因子 2538 2017-11-14