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ELISA常见样本收集处理方法

时间:2017-07-18 15:21:30 浏览:

      收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因

需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20

可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

                  

◇液体类标本:    

    标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血

可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。

                  

◇血清:                  

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

                  

◇血浆:                  

  应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin

2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

                  

◇尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液:

  用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

                  

◇细胞培养上清:        

  检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,

PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

                 

◇组织标本:        

  切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/mlAprotinin(抑肽酶)。

用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清置于-20度或-70度保存。如有必要,

可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。


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