免疫组织化学常用检测方法

免疫组织化学（immunohistochemistry）技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物（如荧光素或辣根过氧化物酶等）的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

免疫组织化学常用的检测方法有ABC法、SP法等，这些方法的工作原理大同小异：

1.ABC法：首先按一定的比例将亲和素与酶标的生物素结合在一起，形成亲和素-酶标生物素复合物，即ABC复合物。第一抗体不被标记，以生物素标记第二抗体，标记的二抗与复合物结合。染色步骤依次为第一抗体、生物素标记的第二抗体、ABC复合物，最后进行酶显色反应。由于亲和素对生物素有极强的特异性结合力，具有多价性，产生多级放大，从而提高了生物反应的敏感性和特异性。

推荐产品：

PEROXIDASE VECTASTAIN^® ABC Kit

名称	货号	规格	供应商
Standard	PK-4000	1kit	Vector
Goat IgG	PK-4005	1kit	Vector
Guinea Pig IgG	PK-4007	1kit	Vector
Human IgG	PK-4003	1kit	Vector
Human IgM	PK-4009	1kit	Vector
Mouse IgG	PK-4002	1kit	Vector
Mouse IgM	PK-4010	1kit	Vector
Rabbit IgG	PK-4001	1kit	Vector
Rat IgG	PK-4004	1kit	Vector
Sheep IgG	PK-4006	1kit	Vector

2.SP法：染色步骤依次为第一抗体、生物素标记的第二抗体、酶标记的亲和素，最后进行酶显色反应。Vectorlabs公司的SP法试剂盒，可进行快速染色（15分钟），具有同ABC试剂盒同样的优点，操作过程更为简单。

推荐产品：

名称	货号	规格	供应商
VECTASTAIN® Universal Quick Kits，R.T.U	PK-7800	1 Kit	Vector
VECTASTAIN® Universal Quick Kits，concentrate	PK-8800	1 Kit	Vector
DAB, MOUSE免疫组化试剂盒	ENS003	3ml (60片)	欣博盛
DAB, MOUSE免疫组化试剂盒	ENS003	6ml (120 片)	欣博盛
DAB, RABBIT免疫组化试剂盒	ENS004	3ml (60片)	欣博盛
DAB, RABBIT免疫组化试剂盒	ENS004	6ml (120片)	欣博盛

3. 非生物素-亲和素方法：免疫组化染色实验过程中，在选择使用生物素-卵白素或生物素-链霉菌卵白素检测系统时(如ABC、LSAB、

SP法)，由于有些组织和器官 ,如肝、肾、脑、胰、乳腺、脂肪、子宫内膜和骨骼肌组织等(如腺上皮组织)内源性生物素含量比较高，特别在

使用高温加热修复方法暴露抗原决定簇后，组织内源性生物素大量暴露，容易造成假阳性。Vectorlabs公司开发的ImmPRESS
超敏聚合酶-抗体检测试剂，具有快速、敏感和背景清晰等特点。其原理是：采用新的聚合酶方法，将多个酶分子通过化学键偶联至有机物骨架上形成酶聚合物，再与抗体偶联，从而减少操作步骤，节省了时间。并避免了传统的以右旋糖酐或其它高分子材料为骨架所导致的空间位阻以及生物素-亲和素内源性干扰的不足。

推荐产品：

名称	货号	规格	供应商
ImmPRESS™ Anti-Rabbit Ig (peroxidase) Reagent	MP-7401	50 ml	Vector
ImmPRESS™ Anti-Mouse Ig (peroxidase) Reagent	MP-7402	50 ml	Vector
ImmPRESS™ Anti-Goat Ig (peroxidase) Reagent	MP-7405	50 ml	Vector
ImmPRESS™ Universal Antibody Kit	MP-7500	50 ml	Vector

4、免疫荧光：免疫荧光技术的原理基本相同，只是用荧光素作为显色系统。使用荧光标记抗体，直接定位、定性检测组织或细胞蛋白表达情况。较免疫组化具有灵敏度高、操作简单的优点。缺点是染色组织片不能长期保存。

5、免疫双重或多重标记法：用不同颜色的荧光素或酶，来标记不同的抗原；（1）使用相同的酶系，选用不同的底物来检测每一个抗原；（2）使用不同的酶系，选用其相应的底物来检测每一个抗原。

Vector公司多抗原检测底物选择参考表

阴影代表的为HRP底物；“+”代表对比色很好，“-”代表不适合配合双染

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