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【储存条件】

 -80°C 恒温保存，避免反复冻融，有效期六个月；干冰运输。 

【产品简介】

 DH5α大肠杆菌菌株是一种常用于质粒克隆的菌株，其基因型为 F-φ80 lacZ△M15△(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-, mk+) supE44-thi-1 gyrA96 relA1 phoA。φ80lacZ△M15 基因的产物可通过与 pUC 载体编码的 b-半乳糖苷酶氨基端α互补，实现蓝白 斑筛选。recA1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。本产品是经特殊工艺处理得到的 DH5α化学 感受态细胞，使用 pUC19 质粒检测，转化效率可高达 10 8 cfu/μg DNA。 

【产品组份】

 M5 DH5α Competent Cell，pUC19（0.1 ng/μl）。 

【使用方法】

 按照无菌操作规程进行下列操作步骤： 

1. 取感受态细胞置于冰浴中融化，待完全化冻后轻轻混匀。如需分装，可将融化的细胞悬液转移到无菌、预冷的离心管 中，置于冰浴中备用。混匀、分装时动作应轻缓，以防细胞破裂。 

2. 向 50~100μl 细胞悬液中加入目的 DNA，轻轻混匀，冰浴中放置 30 分钟。 

注意：加入 DNA 的体积以不超过感受态细胞体积的十分之一为宜。 

3. 将离心管转移至 42°C 水浴中热激 60~90 秒，然后快速将离心管转移到冰浴中冷却 2 分钟。该过程不要摇动离心管。

4. 向离心管中加入 500~900μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37°C 200 rpm 左右振荡培养 45~60 分钟，使菌体复苏并表达质粒上的抗生素抗性基因。

5. 根据实验要求，取适量转化后的菌液加到含相应抗生素的 LB 固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。待液体被完全 吸收后，37°C 倒置培养约 16 小时。 

注意：涂布量的选择应根据目的 DNA 的性质和浓度适当进行调整，通常可按下述方法涂布： 

a. 目的质粒 DNA 在 1 ng 左右时，φ90 mm 平皿可涂布 100μl，φ55 mm 平皿可涂布 50μl；目的质粒浓度较高 时，应相应减少涂布量。 

b. 连接产物的转化菌液可通过 4,000 rpm 离心 1~2 分钟后，吸除大部分上清，用剩余的 100~200μl 上清重悬菌 体，涂布于同一块琼脂平板上。 

【注意事项】 

1. 融化后的感受态细胞应及时进行转化，以免降低转化效率；融化后不宜再次冻结保存。 

2. 整个操作过程要轻柔，避免移液枪吹吸。 

3. 请使用传热性能好的薄壁试管或离心管，换用不同的试管或离心管时，应摸索热激时间，以获得最佳转化效率。 

4. 请保留剩余的连接反应液，以便在转化实验不成功时重新进行转化。 

5. 经验表明，使用 SOC 培养基复苏比使用