产品介绍
NanoEnter® Transfection Reagent 是一种采用纳米技术合成的生物可降解的高性能转 染试剂,不含动物来源组分。该纳米聚合物可快速地与 DNA 形成稳定的复合物,通过细胞 膜进入到细胞内,整个转染过程快速、高效、低毒、重复性好。
产品特色
1.适用于多种细胞系的转染,结果重复性好
2.细胞毒性低,转染复合物添加前后,不需要更换培养基
3.可瞬时及稳定转染
4.血清和抗生素耐受性高,培养基可含或不含血清和抗生素
5.操作简单,NanoEnter-DNA 复合物孵育 5min 即可转染
操作步骤 以 12 孔板为例:
1. 转染用细胞准备:转染前接种细胞于合适的容器中,培养约 24h,细胞密度 70%-90%为 宜,确保细胞处于最佳状态
2. 将 1µg 质粒 DNA 用 100µl 合适的稀释液(如 Opti-MEM,无血清 DMEM 或 150mM NaCl 溶 液),质粒终浓度为 0.01µg/µl, 轻柔混匀制备 DNA 稀释液。
★ 注意:需先稀释 DNA,且质粒终浓度为 0.01µg/µl,再加入 NanoEnter®转染试剂,不可颠倒顺序,否则会显著降低转染效率。
3. 将 2 µl NanoEnter® Transfection Reagent 直接添加至含 DNA 的稀释液中,轻柔混匀。
★ 注意:一般细胞系的 NanoEnter:DNA 比例为 2:1 或 3:1 间获得较高的转染效率,研 究者根 据自己的细胞系,在 NanoEnter:DNA=2:1;3:1;4:1;5:1 优化,获得最 高转染效率。
4. 在室温条件下孵育转染试剂 NanoEnter:DNA 复合物 5 分钟,转染复合物即可制备完成。
★ 注意: NanoEnter® Transfection Reagent 可与 DNA 分子快速形成复合物,通常 5 分钟孵育时间即可完成。某些情况下(如特殊细胞类型及稀释比率等),需要延长孵 育时间,最长为 20 分钟,根据您的特殊细胞系类型及稀释比率不同来优化孵育时间。
5. 取出细胞培养皿,无需弃去生长的培养基,将 NanoEnter® Transfection Reagent-DNA 复合 物逐滴加至细胞中。
★ 注意: NanoEnter® Transfection Reagent 对血清和抗生素耐受性高,含抗生素的制备DNA预混液 加入NanoEnter ® Reagent 5min NanoEneter ® :DNA 复合物加入细胞 完全培养基对转染效率影响不大。
6. 转染后,培养细胞 18-72 小时后对细胞进行鉴定或加入抗生素筛选稳定克隆。
★ 注意:不同细胞系对本转染试剂的敏感度不一样,如果有明显的细胞毒性等情况发 生,请转染后 4-6 小时更换培养基。
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