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【产品简介】
钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。
Calcein-AM 的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。尽管 Calcein-AM 本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein-AM 能脱去 AM 基，产生的 Calcein 能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm，发射: 515 nm)。因此 Calcein-AM 仅对活细胞染色。另一方面，作为核染色染料的 PI 不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm，发射: 617 nm)。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用 545 nm 激发，仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定 Calcein-AM 和 PI 的合适浓度。
【储存条件】 4℃避光干燥，12 个月
【产品组分】
MF939-01 MF939-05
Calcein-AM 4mM in DMSO 10uL 50uL
PI (2mM) in water 30uL 150uL
【操作说明】
用荧光显微镜观察细胞形态，以 HeLa 细胞染色为例，请注意不同的细胞种类、不同浓度，有不同的观察条件。根据细胞条件，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
1. 染色溶液的配制
1) 将 Calcein-AM 储备液和 PI 储备液平衡到室温。
2) 分别加 2.5 µl Calcein-AM 原液和 12.5 µl PI 原液至 5 mL PBS（pH=7.4）中配制成染色工作液。染色工作液中 Calcein-AM 的浓度为 2 µmol/L，PI 的浓度约为 5 µmol/L。
2. 细胞染色
1) 染色 HeLa 细胞等贴壁细胞时，先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞，制备成细胞悬液。
2) 将细胞悬液离心 3 分钟 (1,000 rpm)。
3) 去除上清液，加入 PBS 缓冲液，细胞数量调整至 10e5-106个/ml。再用移液器充分混匀。
4) 由于培养基中的血清等含有酯酶，Calcein-AM 遇水分解，会导致空白上升，所以需离心数次，用 PBS 洗涤数次直到完全洗净。
5) 将 200 µl 细胞悬液移至小试管中，加入 100 µl 染色工作液，在 37℃下孵育 15 分钟。
6) 在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7) 在荧光显微镜下，先用 490±10 nm 波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用 545 nm 波长激发，能够看到红色的死细胞。
3. 染色试剂的最佳浓度
Calcein-AM 和 PI 最佳浓度根据细胞种类而定，通过以下的操作，可找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1) 通过在 0.1%皂苷或 0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育 10 分钟或通过在 70%乙醇中孵育 30 分钟制备死细胞。
2) 用 0.1-10 µM PI 溶液对死细胞染色，以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的 PI 浓度。
3) 用 0.1-10 µM Calcein-AM 溶液对死细胞染色，以便找到不对细胞质染色的 Calcein-AM 浓度。接着用该浓度的 Calcein-AM 对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。
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货号
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规格
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销售价
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MF939-01
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100T
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498.00
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MF939-05
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500T
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1598.00
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