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【产品简介】

本产品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon 等）实时荧光定量 PCR 的预混体系，浓度为 2×，包含 M5 GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组 DNA 靶序列和RNA 反转录后的 cDNA 靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本品含有的 GoldStar Taq DNA Polymerase是一种Taq酶抗体修饰的，全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育30秒即可。 独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的结合，显著提高了 PCR 的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。适用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。适用于无需 ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI，Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器：Roche LightCycler480，Roche LightCyler96，Bio-radiCyleriQ,iq5,CFX96等。

【产品组分】

                                                        MF055-plus-05 

2× M5 GoldStar TaqMan Mixture           5x1ml                  

ddH2O                                                    5x1ml                 

【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，2-8˚C保存，尽量避免反复冻融

【使用方法】

以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1.PCR反应体系：

                                                         试剂 50μl反应体系        浓度

2× M5 GoldStar TaqMan Mixture              25μl                    1×

Forward Primer，10μM                               1μl                    0.2μm

Reverse Primer, 10μM                                  1μl                    0.2μm 

Probe, 10μM                                                1μl                    0.2μm

Template DNA                                              2μl

50×Low ROX or High ROX (optional)          1μl                    1×

ddH2O up to 50 μl

注意：

1）通常引物浓度以0.2 μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。

2）使用探针的浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。

3) 通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

4) 不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

2. PCR反应程序

 注意！本产品预变性反应只须在95˚C 30秒下完成！

 两步法PCR：

 步骤          温度           时间

 预变性       95˚C          30s

 变性          95˚C          15s

 退火/延伸  60˚C          1min  35-40 个循环

注意：

1）本产品所采用的热启动酶须在预变性95˚C，30秒条件下实现酶的活化。

2）建议采用两步法PCR反应程序，若因为使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56˚C-64˚C的范围作为设定参考。

【注意事项】

1使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。

2 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20˚C，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在 2-8˚C保存。