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【产品简介】

本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行实时荧光定量 PCR 的专用 2× 浓度预混液。利用Hot Start Taq DNA Polymerase 高温加热前，anti-Taq 单克隆抗体与 Taq 酶结合，抑制 Taq 酶的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。Anti-Taq 单克隆抗体在 PCR 反应第一循环的变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后的 Taq Polymerase 反应，大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。优化浓度的 SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入 DNA 双链后，荧光信号增强，而不掺入链中 SYBR Green I 染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。

 【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期 24 个月。经常使用，可置于 4˚C 保存至少6个月。

 【适用范围】

主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列的定量检测。本品具有高通用性，可用于各种仪器。因产品中已经添加了ROX Reference Dye，因此可以用于需要校正荧光信号的仪器（如 ABI Prism7000/7300/7700/7900HT 和 ABI Step One /ABI Step One Plus 荧光定量 PCR 仪）。也可以用于 Stratagene、Roche、Bio-RAD 和 Eppendorf 等各种荧光定量 PCR 仪上采用 SYBR Green 法进行基因表达分析和核酸检测等实验。

【操作示例】

按下表配制 PCR 反应体系（冰上操作）:

 *:10~100 ng 基因组 DNA ，或 1~10 ng cDNA 为参照 ，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。另外 two Step RT PCR 反应的 cDNA（RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的10 % 。

建议的PCR条件：

*一般情况下目标片段在 300 bp 以下时，延伸时间 30 秒即可，但一部分仪器，为测定稳定的荧光，延伸时间需要大于 30 秒。扩增曲线散乱，或者各孔间差异较大时，请设定较长的延伸时间（45-60秒）。