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【产品简介】 

独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，，然后用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质 膜，DNase 直接在柱上消化残留 DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。 

【产品特点】

 1. 完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。

 2. 简捷，单个样品操作一般可在 40 分钟内完成。

 3. 配套 DNase I 柱上消化，得到的 RNA 不残留 DNase 消化，可直接用于反转录 荧光定量 PCR、二代测序、芯片、RACE 等实验。

 4. 可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。

 5. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达 2.0～2.2，无 DNA 残留，可直接用于荧光定量 PCR、RT-PCR、芯片、二代 测序、Northern-blot 等各种实验。

【操作流程】

 提示： 第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇!

 1. 直接研磨法（推荐）: 

 a. 新鲜植物组织称重后取 100-200mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取 100-200mg 放入研 钵）， 加入 1 ml 裂解液 RPA 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液 RPA 立刻充分接触以抑制 RNA 酶 活性。

 b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡 15 秒，13,000rpm 离心 5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。

 c. 取 480μl 裂解物上清（在不超过 RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心 管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

 d. 立刻接操作步骤的步骤 3。

 2. 液氮研磨法: 

 a. 取 500μl 裂解液 RPA，转入 1.5ml 离心管中。

 b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取 50-100mg 细粉转入上述装有 RPA 的离心管, 立即用手剧烈振荡 20 秒，充分裂解。   c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高 产量。

 d. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。

 e. 取裂解物上清（在不超过 RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清 体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

 f. 立刻接操作步骤的步骤 3。

 注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用 1ml 的裂解液 RPA 和 100-200mg 的样品。

 3. 将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废 液。 确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

 4. 加 350μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 分钟，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。

 5. DNase I 工作液配制：取 45μl DNase I buffer 和 5μl RNase free DNase I 在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要 按照比例放大制备工作液）。

 6. 向吸附柱 RA 中央加入 50μl 的 DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置 15 分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工 作液滴在 O 型圈或是离心柱管壁上。

 7. 向吸附柱 RA 中加入 350μl 去蛋白液 RW1， 12,000 rpm 离心 30 秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

 8. 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW，重复一 遍。

 9. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

 10. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。

 11. 如果预期 RNA 产量>30μg，加 30-50μl RNase free water 重复步骤 10，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱 重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。 洗脱两遍的 RNA 洗脱液 RNA 浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高 15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

 注意：如果不需要做荧光定量 PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略 DNA 酶柱上消化的步骤，具体就是第 4 步骤的“加 350μl 去蛋白液 RW1”改成“加 700μl 去蛋白液 RW1”，同时省略步骤 5，6，7。