细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。

一.MTT

MTT法检测原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan），而死细胞无此功能。用DMSO溶解甲臜后在490nm波长处测定其吸光度值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

MTT法检测细胞增殖算是比较常用的方法了，价格便宜，不过其甲瓒产物不溶于水，需有机溶剂溶解后方可检测，其增加了工作量，同时对结果的准确性产生影响，重复性较差吧。

二.CCK8

CCK8检测原理：CCK8中的主要成分WST®-8能被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜，生成甲臜的量与细胞数成正比，可间接测定活细胞数量。

相比较于MTT而言，CCK8的灵敏度要更高，其生成的甲瓒产物溶于水，重复性和准确性上要优于MTT法，对于细胞的毒性较小，不过价格也是相比MTT要贵一截。

三.通过标记DNA检测细胞增殖/rdu和EDU

Brdu是一种胸腺嘧啶核甘类似物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期）参入正在复制的DNA中，之后我们通过抗Brdu的抗体与荧光二抗快速检测细胞的DNA复制活性。EDU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，类似于一种化学反应吧，而无需抗原抗体结合。

相比较而言，Brdu或者edu更适合用于siRNA、miRNA、小分子化合物及其药物筛选等。同时 Brdu或者EDU也适用于小鼠，大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的细胞增殖检测。

一般对于细胞来说都是免疫荧光的常规步骤吧，只是需要一步盐酸进行变性DNA和中和。

1.细胞铺板24孔板或者6孔板。可以进行加药处理细胞

2.加入一定终溶度的 Brd U 继续培养一定的时间 。随后弃去孔内溶液，PBS 润洗 3 次。

3.4％多聚甲醛固定细胞 30 min，PBS 再润洗3 次

4.0.1％Triton  X-100 处理细胞 15  min 后，接着 PBS 润洗 3 次

4。接着 2M  HCl 处理 30 min，再加入 0.1M 的硼酸中和 10  min，PBS 润洗 3 次。

5.滴加 5％BSA 室温封闭 30  min，弃去液体，滴加 1:200 稀释的 Brd U 一抗，4℃孵育过夜。

6.次日，弃去一抗，PBS 润洗 5次，在避光条件下，滴加 1:50 稀释 FITC 标记二抗，室温孵育 1 h 后，PBS 再润洗 5 次。

7.pbs洗5遍，滴加DAPI溶液，室温孵育5到10分钟，PBS洗5遍。

8.荧光显微镜观察。拍照。

关于EDU，目前一般都是拿试剂盒做的，操作简单方便。步骤相比Brdu而言，少了DNA变性，无需抗体孵育等环节。