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PreScission 蛋白酶

时间:2017-11-28 12:12:20 浏览:

 

产品编号

产品名称

产品包装

产品价格

P2308

TEV Protease

10000U

1298.00

 

产品介绍: 

TEV Protease是一种在大抽杆菌中重组表达的带His标签(6X His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶,能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser,并在GlnGly/Ser氨基酸残基之间进行酶切,常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)His或者其它标签的蛋白酶。
建议把GSTHis等标签设计在融合蛋白的N端,并在GSTHis等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GSTHis标签被酶切后,在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基,从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒,可以考虑选购碧云天的质粒pET-N-His-TEV (P2905)
TEV Protease
的最佳的酶切温度是30℃,但在4-30℃和pH6.0-8.5范围内皆有活性。因此在实际操作过程中,为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性,建议在4℃酶切过夜。
TEV Protease
还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力,因此对于很多用鎳柱纯化的His标签目的蛋白,可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中,在4℃边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白,溶液中带有His标签的本TEV Protease以及切除下来的His标签,都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购碧云天的BeyoGold His-tag Purification Resin 
(
P2210/P2218/P2220)
His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)

酶活性单位定义:30℃,pH8.0条件下反应1小时,能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。
碧云天TEV Protease酶活性鉴定结果可参考图1

           

1.TEV Protease切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与 TEV Protease进行反应,底物的用量为3μg,酶的用量依次为00.10.250.50.6712U30°C1X TEV Buffer中反应1小时后取样进行
SDS-PAGE
电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白和约26kDGST标签。

TEV Protease分子量大小约28kDa,纯度:≥95%
TEV Protease
储存液组成为:25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0
10X TEV Buffer
组成为:500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0
本产品一个包装含有10000单位的酶,可用于约30mg带有TEV Protease识别位点的融合蛋白的切割。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

P2308-1

TEV Protease (1U/µl)

10ml

P2308-2

10X TEV Buffer

20ml

说明书

1

 

保存条件:
      -20
℃保存。
注意事项:
      
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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