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BD 细胞磁珠分选技术

时间:2017-08-22 09:53:47 浏览:

实验原理:

免疫磁珠法分离细胞是,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。 

BD IMag TM Cell Separation System 是利用磁性细胞分离装置:BD IMagnet TM ( 货号:552311) 来分离细胞的系统。 不需要利用 Column,只要利用圆底管 (round-bottom tube) 及「Direct Magnet Technology」的技术,就可简单、 有效率地在短时间内来分离出想要的细胞。与其他类似产品相比,可得到较佳的纯度及回收率。


免疫磁珠法分为正选法和负选法:

正选法:磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞

负选法:磁珠结合不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞

磁分离细胞的重要指标是:纯度和得率,这取决于磁珠所连接单抗的特异性,磁珠大小(磁性)以及分选方式(正选法以及负选法),太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又会影响细胞活性,也无法直接上流式。纯度:正选>负选,得率负选>正选


二抗磁珠试剂

若找不到带有想要特殊标记抗体的磁珠试剂,可以利用其一抗(primary antibody)和带有磁珠的二抗 (secondary  antibody),间接与想要分离的细胞接合,再以磁力架 (BD IMagnet) 进行细胞分离。例如: Biotin 一抗和二抗磁珠试剂 Streptavidin Particles Plus – DM ( 货号:557812) 配合使用;带有 PE 荧光的一抗可与二抗磁珠试剂R-Phycoerythrin (PE) Magnetic Particles - DM ( 货号:557899) 配合使用。


常见问题

1.IMag  Particles-DM可用Column式的磁珠分离装置来进行实验吗?
BD TM IMagnet 和 Column 式的磁珠分离装置磁力强度有异,所以 IMag Particles-DM 无法用 Column 式的磁珠分离
装置来进行分离实验。

2.在进行BD  IMag 实验时,一次最多可以进行多少细胞数的分离?

约 1.2X10 9 cells。

3.在进行BD IMag 实验时,适合采用的圆底管是?

BD 原厂建议使用 BD Falcon,Polystyrene ( PS ) 材质的圆底管。若不是使用 Polystyrene 材质的圆底管来进行实验,
可能会使细胞回收率降低。

4.BD  IMag系列的磁珠大小及材质为何?

直径 100-450nm,外面包覆着 Dextrin 的氧化铁。

5.BD  IMag与其他品牌比较的优点是?

目前市面上主要有两种磁珠分离系统:

small particle系统:磁珠半径约50nm,优点是: 不影响后续细胞培养,可直接用流式细胞仪检测,不会对散射光有影响。
缺点是: 需要磁力较强的磁铁来进行分离;分离速度较慢,回收率较低; 需要一次性的 column,不能在一般试管中进行,成本较高。

large particle系统:磁珠半径1200-4500nm,优点是:操作简单,可在一般 PS 试管中完成;分离速度较快,回收率较高;成本较低。

缺点是:可能会影响后续细胞培养;可能会不利于流式细胞仪检测,造成管路阻塞; 纯度较低。



BD IMag 与其他品牌比较的优点是?

磁珠大小介于两种之间结合以上两者的优点:操作简单,可直接在PS试管中完成;不影响后续细胞培养;分离后可直接用流式细胞仪检测;分离速度快,纯度及回收率高;成本低。

 




BD细胞磁珠分离系统简介



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