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产品特点：
1、本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
2、本产品是一款已被广泛使用的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，其使用效果已经得到广大可以用户的认可。
原理：
蛋白质混合样品中由于各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带电荷多少等因素会造成的电泳迁移率有差别。因此需要在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），从而形成蛋白质－SDS复合物，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，使蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，从而实现对蛋白质的分离。
操作步骤：
I.灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表1）
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具；
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合；
3、加入10%APS 和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整；
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
II灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表2）
1、去除覆盖在分离胶上的水层；
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合；
3、加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡；
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合；
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔；
8、进行常规电泳操作。
注意事项：
1、10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS；
2、PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变 APS 及 TEMED 的用量，控制 PAGE 凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的 APS 及 TEMED 量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整；
3、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生；
4、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快；
5、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套；
6、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
表1、配制SDS-PAGE分离胶
|
分离胶 浓度 |
凝胶 体积 |
所需各组分体积（单位：ml） |
||||
|
双蒸水 |
30%Acr-Bis |
分离胶缓冲液 |
10%APS |
TEMED |
||
|
6% |
5ml |
2.6 |
1.0 |
1.3 |
0.05 |
0.004 |
|
10ml |
5.3 |
2.0 |
2.5 |
0.1 |
0.008 |
|
|
15ml |
7.9 |
3.0 |
3.8 |
0.15 |
0.012 |
|
|
20ml |
10.6 |
4.0 |
5.0 |
0.2 |
0.016 |
|
|
8% |
5ml |
2.3 |
1.3 |
1.3 |
0.05 |
0.003 |
|
10ml |
4.6 |
2.7 |
2.5 |
0.1 |
0.006 |
|
|
15ml |
6.9 |
4.0 |
3.8 |
0.15 |
0.009 |
|
|
20ml |
9.3 |
5.3 |
5.0 |
0.2 |
0.012 |
|
|
10% |
5ml |
1.9 |
1.7 |
1.3 |
0.05 |
0.002 |
|
10ml |
4.0 |
3.3 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15ml |
5.9 |
5.0 |
3.8 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20ml |
7.9 |
6.7 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
12% |
5ml |
1.6 |
2.0 |
1.3 |
0.05 |
0.002 |
|
10ml |
3.3 |
4.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15ml |
4.9 |
6.0 |
3.8 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20ml |
6.6 |
8.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
15% |
5ml |
1.1 |
2.5 |
1.3 |
0.05 |
0.002 |
|
10ml |
2.3 |
5.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15ml |
3.4 |
7.5 |
3.8 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20ml |
4.6 |
10.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
表2、配制SDS-PAGE浓缩胶
|
凝胶体积 |
所需各组分体积（单位：ml） |
|||||
|
双蒸水 |
30%Acr-Bis |
浓缩胶缓冲液 |
10%APS |
TEMED |
||
|
2ml |
1.4 |
0.33 |
0.25 |
0.02 |
0.002 |
|
|
4ml |
2.7 |
0.67 |
0.5 |
0.04 |
0.004 |
|
|
6ml |
4.1 |
1.0 |
0.75 |
0.06 |
0.006 |
|
|
8ml |
5.5 |
1.3 |
1.0 |
0.08 |
0.008 |
|
表3 、 SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
|
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
|
6%胶 |
50-150kD |
|
8%胶 |
30-90kD |
|
10%胶 |
20-80kD |
|
12%胶 |
12-60kD |
|
15%胶 |
10-40kD |
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| 1 | 鼠尾鉴定试剂盒 | 76 | 2025-01-05 |
