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【产品简介】 

 本试剂盒适用于从粪便样本中提取总 DNA，包括样本中的细胞、细菌、寄生虫以及病毒的总 DNA，也适用于含有高浓度 PCR 反应抑 制剂的样本。本品可处理多至 300 mg 的粪便样本，纯化获得主要为 20-30 kb 的 DNA 片段，纯化过程中不需苯酚或氯仿等有毒溶剂， 无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的 DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的 DNA 高效结合到吸附柱上，同时粪便 中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜，PCR 和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除，最 后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度 DNA。纯化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。 

【储存条件】 常温运输，室温（15~30˚C）保存。 

【实验准备】 

 1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。

 2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在 Buffer GW1 和 GW2 中加入无水乙醇。

 3．使用前请检查 Buffer SL 和 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer SL 和 Buffer GL 于 56˚C 水浴重 新溶解。

 4．如果下游实验对 RNA 污染比较敏感，可以在加入 Buffer SL 后加入 4 μl DNase-Free 的 RNase A (100 mg/ml)。 

【操作步骤】

 1．取 100-300 mg 粪便样本，置于离心管（自备）中。

 2．加入 1 ml Buffer SW，涡旋振荡 3-5 分钟，使样本均匀分散于溶液中。12,000 rpm（~13,400×g）离心 1 分钟，弃上清。 

 3．加入 1 ml Buffer SL，涡旋振荡 3-5 分钟，使样本均匀分散于溶液中，65˚C 水浴 20 分钟，期间可每隔 5 分钟涡旋振荡 15 秒。 注意：如需去除 RNA，可在上述步骤完成后，加入 4 μl 浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 溶液，震荡混匀，室温放置 5-10 分钟。

 4．12,000 rpm 离心 3 分钟，将上清移至新的离心管（自备）中。

 5．向上清液中加等体积 Buffer GL，颠倒混匀 15-25 次，冰上放置 5 分钟。12,000 rpm 离心 5 分钟。 注意: 此时液体可能为透明或浑浊状态，均不影响实验。

 6．将步骤 5 中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm （～13,400×g）离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

 7．向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附 柱重新放回收集管中。

 8．重复步骤 7。

 9．向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附 柱重新放回收集管中。

 10. 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

 11. 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空滴加 50-100 μl Buffer GE 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液，-20˚C 保存 DNA。

 注意：

 1）如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应 保证其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围），pH 值低于 7.0 时会降低洗脱效率。

 2）离心之前室温孵育 5 分钟可以增加产量。

 3）用另外的 50-100 μl Buffer GE 或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

 4）如果要提高 DNA 的终浓度，可以将步骤 11 所得的 DNA 洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤 11；可以增加 DNA 的终 浓度，但可能会减少总产量。如果 DNA 的量小于 1 μg，推荐用 50 μl Buffer GE 或灭菌水洗脱。

 5）保存在水中的 DNA 会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用 Buffer GE 洗脱并于-20˚C 保存。

 6）基因组 DNA 模板中残余的微量 PCR 抑制物可能对 PCR 反应产生不良影响，可将 DNA 稀释 2-10 倍通常即可解决。