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【产品简介】

本试剂盒适用于从细菌中制备高质量的基因组DNA。优化的缓冲液体系能迅速裂解细菌和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高盐状态下选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除细菌代谢物和蛋白等，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱下来。 使用本试剂盒可从过夜培养的细菌培养液中快速提取高纯度的基因组DNA，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。

【产品特点】

1.简便快速：1小时内可获得高纯度的基因组DNA；

2.质量好：可直接进行PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。

 【产品组份】

 【储存条件】 蛋白酶K于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）。

【注意事项】

1. 如Buffer GTL和Buffer GL产生沉淀，可在56℃水浴溶解；

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段小，提取量下降；

3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作；

4. 按要求在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

【自备试剂】

 溶菌酶（提革兰氏阳性菌才用，阴性菌不需要，聚合美货号L99987-5g）、溶菌酶缓冲液（20 mM Tris，pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100）、无水乙醇、RNase A（可选，聚合美货号mf109-plus-01）。

【操作步骤】

 注意：使用前请先在缓冲液Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签

1. 取0.5 ~ 3 ml过夜培养的菌液，室温10,000 rpm离心1 min，弃上清。

注意：根据菌液的浓度决定取液量，当OD₆₀₀=1时，1ml菌液浓度为10⁹个细胞，菌液的量不要超过10⁹个细胞，太多会使离心柱的膜堵塞，提取的基因组DNA的量减少，纯度降低。

2. 加入200 ul Buffer GTL，用枪头充分吹打或用涡旋振荡器充分悬浮。

注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法为：加入180 µl终浓度为20 mg/ml的溶菌酶溶液（买粉末自配，溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在溶菌酶缓冲液中，否则会导致溶菌酶无活性)，37 ℃处理30 min以上。如要去除RNA，可加入浓度为100 mg/ml的RNase A 4 ul，室温处理5 min。

3. 加入20 ul Proteinase K溶液，充分混匀。

4. 加入200 ul Buffer GL，充分混匀，56℃水浴10 min，孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散均匀。溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的水珠。

注意：Buffer GL加入时可能会产生白色沉淀，一般56℃时会消失，不影响后续实验，如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取的DNA量少或者提取的DNA不纯。

5. 加入200 ul无水乙醇，充分震荡，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。

6. 将一个离心吸附柱放入收集管中，将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，弃收集管中的滤液。

7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer GW1，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中滤液。

注意：按要求在Buffer GW1中加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。

8. 向吸附柱内加入600 ul Buffer GW2，室温12,000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。

注意：Buffer GW2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。

9. 向吸附柱内加入500 ul Buffer GW2，室温12,000 rpm离心2 min，弃收集管中废液。

注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组DNA的后续使用。

10. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，加入50 ~ 100 ul Buffer GE，室温放置2 min，12,000 rpm离心1 min，离心管底溶液即基因组DNA。

注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液Buffer GE在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2 min，再次离心收集。