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【产品简介】
本试剂盒适用于高纯度质粒 DNA 的中量制备。菌体经碱裂解、高盐、低 pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离
心柱硅胶膜吸附。然后通过清洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质，最后在低盐、高 pH 条件下洗脱得到高纯度无内毒素的质粒 DNA。
使用本试剂盒可从 5 ~ 15 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达 70 ug 的质粒 DNA，所得质粒除可用于常规分子生物学实验。
【产品特色】
1. 快捷、高效：操作简便，得率高，节约时间；
2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净；
【储存条件】
15-25℃干燥条件下，可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃。单独包装的 RNase A 在室温可稳定保存 12 个月。加入
RNase A 后的 Solution I 应置于 2-8℃保存，可稳定保存 6 个月。若溶液 II 产生沉淀，应在使用前置于 37℃下溶解沉淀后再使用。
【操作步骤】
柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 的平衡液 BL，12,000 rpm (-13,400×g ) 离心 1 min，弃收集管中滤液，
将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
1. 取 5 ~ 15 ml 过夜培养的菌液，室温 12,000 rpm 离心 1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取 1.5 ml 菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）
2. 加入 500 ul Solution I，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀混浊的棕红色。
（注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）
3. 加入 500 ul Solution II，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。
（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 片段的污染，所用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏，如未完全变得清亮，可
能是菌体太多，可增加 Solution II 的用量，在后续的操作中 Solution III 的用量也要相应增加）
4. 加入 500 ul Solution III，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的沉淀物产生，继续混匀直到完全变为黄色，然后 12,000 rpm 离心 10
min，将上清液转移到一干净的离心管中，加入 500 ul 异丙醇混匀。
（注意：Solution III 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色
完全变为澄清的黄色）
5. 将混合液转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心 0.5min，弃收集管中滤液。
（注意：吸附柱一次只能转移 750ul 液体，剩余液体分次转入）
6. 加入 500 ul Buffer WB1，室温 12,000 rpm 离心 0.5 min，弃收集管中滤液。
（注意：Buffer WB 1 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
7.加入 600 ul Buffer WB2，室温 12,000 rpm 离心 0.5 min，弃收集管中滤液。
（注意：Buffer WB 2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
8. 加入 500 ul Buffer WB2，室温 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留液体。
（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）
9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入 100 ~ 200 ul 的洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min。12,000 rpm
离心 1 min，离心管底溶液即质粒 DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间，为了增加
质粒回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集）
【低拷贝或大质粒（>10 kb）提取】
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 10-30 ml 过夜培养物，同时按照比例增加 Solution I、
II、III 的用量，洗脱液 Buffer EB 应在 60℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
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货号
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规格
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销售价
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MF076-01
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50T
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398.00
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